ADC既具有大分子藥物的特異性，又具有小分子藥物的細(xì)胞獨性，且ADC在研發(fā)過程中均需要對其抗體部分和小分子藥物部分進(jìn)行生物定量，LC-MS/MS和LC-HRMS技術(shù)正越來越多的被用于大分子表征和定量。

與傳統(tǒng)ELISA方法相比，LC-MS方法開發(fā)周期更短，方法的通用性更好；且基于高分辨質(zhì)譜的LC-HRMS，在對大分子進(jìn)行定量的同時，還可以對ADC類藥物的DAR值進(jìn)行測定，助力完善ADC的生物表征。

LC-MS/MS法定量測定總ADC

通常流程可以分成三個環(huán)節(jié)。

第一親和免疫捕獲，借助對ADC抗體部分具有特異性結(jié)合的抗體或抗原對目標(biāo)總抗進(jìn)行純化；第二步是酶解，生成抗體的特征多肽；后利用LC-MS/MS進(jìn)行檢測定量。

在這種方法中，使用抗payload抗體捕獲ADC。與基于LC-MS/MS的TAb分析類似，來自人Fc區(qū)或CDR區(qū)的肽被用作非臨床研究的標(biāo)志肽，而對于臨床研究，來自CDR區(qū)的標(biāo)志肽被使用。

LC-MS/MS法定量測定總ADC偶聯(lián)有效載荷

偶聯(lián)有效載荷分析的目的是測量與抗體結(jié)合的有效載荷分子的濃度。偶聯(lián)有效載荷涉及有效載荷的直接測量，因此可以提供對靶標(biāo)部位的有效載荷暴露的更準(zhǔn)確的評估，并且可以提供暴露量與療效的相關(guān)性。

LC-MS/MS是偶聯(lián)有效載荷測量的主要平臺。在基于LC-MS/MS偶聯(lián)有效載荷分析中，捕獲劑是針對ADC分子的Ab組分的。因此，免疫捕獲步驟類似于基于LC-MS/MS的Tab分析法。一旦用免疫親和的方法分離，有效載荷分子從ADC釋放，并用LC-MS/MS測量切割的有效載荷，根據(jù)連接子化學(xué)，酶反應(yīng)或化學(xué)反應(yīng)被用于從ADC切割有效載荷。雖然偶聯(lián)有效載荷分析中的替代分析物是一種小分子藥物，但免疫捕獲技術(shù)的使用保證了該分析的大分子生物分析方法驗證指南。

LC-MS/MS法定量偶聯(lián)有效載荷有其局限性。主要的限制是在分析帶有不可切割連接子的ADC時，在ADC免疫親和分離后，ADC的抗體成分需要蛋白分解以釋放用于替代分析物的多肽-連接子偶聯(lián)的有效載荷。在這些情況下，參考標(biāo)準(zhǔn)和穩(wěn)定的標(biāo)記IS可能不易獲得。此外，不可切割的、基于賴氨酸的隨機(jī)偶聯(lián)ADC帶來了挑戰(zhàn)，因為它們在ADC分子蛋白分解后形成多個連接到有效載荷的多肽片段。

游離型獨性小分子的LC-MS/MS定量分析

在ADC藥物的生產(chǎn)過程中，往往需要將多余的獨性小分子盡可能去除，由于其具有超高的獨性，輕微的殘留也會對ADC藥物的安全性帶來更大隱患。對于體內(nèi)實驗，游離型獨性小分子可能來自ADC在血漿中的釋放和目標(biāo)組織的釋放，血漿中的游離型獨性小分子對應(yīng)著ADC的脫靶獨性，是ADC性能考察的重要組成部分。